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讓專業人員告訴你使用細胞計數板時一定要注意哪些事

更新時間:2021-08-03點擊次數:2163

    細胞計數板是一種常用的細胞計數工具,醫學上常用來計數紅細胞、白細胞等而得名,也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數量,是一種常見的生物學工具。

 

    細胞計數板的注意:

    鏡檢計數室。因前一次清洗不到位,或者保存過程中存在污染,更或者因操作不當導致的計數室存在劃痕,若不及時清洗或更換,則會對后期實驗計數產生極大影響。所以,在每次使用血球計數板之前都需要加一步鏡檢計數室,如若在鏡檢時發現計數室有污物,則需按要求清洗并吹干后再進行實驗。

    搖勻后取液。在吸出培養液進行計數之前,需輕輕震蕩試管,使菌體分布均勻,防止聚沉淀,從而提高計數的代表性和準確性。

    先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后,應先在血球計數板上蓋上血蓋片,再用滴管吸取少許菌懸液,從計數區中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液,利用液體的表面張力一次性充滿計數區。若先加菌液再覆蓋血蓋片,則容易因為菌液加入過多,而導致血蓋片未與血球計數板支持柱接觸,血蓋片浮于菌液上方而導致最后計數偏大,同時會因為有氣泡產生而導致計數偏小。

    靜置片刻再計數。靜置5min,待菌懸液不再漂浮流動,酵母菌全部沉降后再將血球計數板放到顯微鏡下進行計數。先在低倍鏡下找到需要觀察計數的大方格及中方格,將中方格移到視野中央,然后撥動轉換器移至高倍鏡進行計數。

    高倍鏡下調亮度。低倍鏡下,用平面鏡和小光圈,可以清晰地看到血球計數板上的酵母菌。但是,撥動轉換器換到高倍鏡后,即使是用了平面鏡和最小光圈,視野里往往還是白茫茫一片,什么都看不見,這時候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進行遮光處理。因為活的酵母菌和培養液的折光率相近,所以要在高倍鏡下將視野調得暗一些。

    掌握計數原則。一般選擇觀察的菌液濃度控制在每個小方格內有4或5個菌體為宜,若其濃度太高,可適當稀釋;并采用“計上不計下,計左不計右”的計數原則。
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